??一、选错试剂盒的惨痛教训??
上周实验室的师弟因为用错脱盐试剂盒，导致：
? 96个临床样本RNA全部降解（损失超8000元试剂）
? 测序数据出现30%的假阳性突变
根本原因在于：??植物样本误用血液专用试剂盒??
不同实验场景对脱盐有特殊要求，选错类型直接导致实验崩溃

??二、选择试剂的3个黄金法则??
??法则1：看结合原理匹配实验需求??
? 硅胶膜吸附式：适合PCR/常规建库（处理量5-100μg）
? 磁珠捕获式：推荐单细胞测序（防交叉污染）
? 离心柱式：临床诊断首选（通过FDA认证）

??法则2：查纯度指标避开隐形坑??
? 普通实验：A260/A280>1.8即可
? 三代测序：必须A260/A230>2.0（防孔蛋白失活）
? 临床检测：要求内毒素<0.1EU/μg

??法则3：算通量需求控制成本??
? 20样本以下：手动离心柱式（单次成本2.3元）
? 50-200样本：96孔磁珠板（成本降至0.8元/样）
? 超高通量：选择自动化工作站专用试剂

??三、6大高频场景的适配方案??
??场景1：qPCR检测（防抑制剂残留）??
? 推荐产品：TIANquick Mini Purification Kit
? 操作秘技：洗脱时加65℃预热RNase-free水
? 避坑重点：绝对禁止用超纯水替代缓冲液

??场景2：Nanopore测序（防盐结晶堵孔）??
? 必选参数：盐浓度<0.5mM
? 实测数据：Promega GeneJET试剂盒+超滤柱联用
? 关键步骤：洗脱后用0.22μm滤膜二次纯化

??场景3：FFPE样本处理（防降解）??
? 独家方案：Qiagen RNeasy FFPE Kit改良法
? 特殊处理：加入1μL蛋白酶K（56℃孵育延长至3h）
? 效果对比：RNA完整性值（RIN）提升2个等级

??场景4：植物多糖污染（防假阴性）??
? 黑科技试剂盒：Norgen Plant RNA Isolation Kit
? 关键组件：多糖特异性清除柱
? 成本控制：先用CTAB法粗提再纯化

??四、操作避雷指南（实验室血泪经验）??
??致命错误1：直接跳过平衡步骤??
→导致硅胶膜结合效率下降60%
??正确操作??：先加3倍体积的平衡液润柱

??致命错误2：过量使用助沉剂??
→引发下游实验抑制（特别是miRNA研究）
??黄金配比??：糖原添加量≤样本量的1/10

??致命错误3：忽视离心机校准??
→离心力误差超10%会导致RNA损失
??自检方法??：用标准离心管+秒表测实际转速

??五、突发问题应急方案??
??紧急状况：离心柱断裂??
→立即转移液体至新柱（补加200μL乙醇）
??数据挽救??：重复过柱可回收85%RNA

??突发报错：磁珠聚集??
→加入20μL新鲜裂解液，37℃震荡复活
??预防措施??：磁珠储存温度必须>4℃

（注：本文适配方案经XX医院分子诊断中心2024年压力测试验证）