各位实验室萌新注意了！上周隔壁组小王提取植物DNA，结果跑胶时发现条带像心电图似的忽上忽下。其实不同样本处理有隐藏开关，今天就拿血液、植物、细菌这三个老大难开刀，手把手教你们避开那些手册上不会写的坑。

??▍血液样本：抗凝剂选择直接决定成败??
刚抽的EDTA抗凝血别急着冻存，先记住这个公式：200μl血液+400μl裂解液是最佳配比。重点来了：裂解时间必须控制在12-15分钟，超过20分钟血红蛋白就会疯狂结合DNA。遇到过提取的DNA发红吗？那是红细胞没裂解完全，记得补加0.1% Triton X-100。

常见翻车现场：

• 冻存血直接提取？冰晶早把DNA切碎了
• 用肝素钠抗凝？等着看PCR完全没扩增吧
• 省掉蛋白酶K？RNA酶分分钟教你做人

??▍植物样本：多糖多酚攻坚战??
刚摘的嫩叶比老叶子难处理你敢信？秘密在于次生代谢物含量。研磨前用液氮速冻都是基础操作，关键是要在裂解液里加2%PVP（聚乙烯吡咯烷酮）。有次我用杨树皮做实验，常规方法得率0.02μg/mg，改良后直接飙升到1.5μg/mg。

独家配方大公开：
CTAB裂解液配比：

• 2% CTAB
• 1.4M NaCl
• 20mM EDTA
• 100mM Tris-HCl（pH8.0）
• 临用前加0.2% β-巯基乙醇

??▍细菌样本：破壁就像拆盲盒??
革兰氏阳性菌和阴性菌的破壁难度差10倍不止！枯草芽孢杆菌这类硬骨头，需要溶菌酶+玻璃珠震荡双管齐下。这里有个省钱的骚操作：用0.1mm直径的氧化锆珠子，破壁效率比普通硅珠高3倍，但震荡时间要缩短到30秒/次，防止DNA断裂。

实测数据对比：

• 传统热裂解法：得率15μg/mL 耗时2小时
• 改良酶解法：得率82μg/mL 耗时45分钟
• 超声破碎法：得率120μg/mL 但片段<500bp

??Q：为什么我的DNA总被蛋白污染？??
A：八成是氯仿-异戊醇抽提时没充分乳化。教你们个绝招：混匀后对着光看分层界面，合格的乳液层应该占总体积1/3以上。要是分层太快，赶紧补加25:24:1的酚-氯仿-异戊醇。

??Q：不同样本能共用提取试剂盒吗？??
A：血样用硅胶膜型，植物用磁珠型，细菌选超声辅助型。去年我用某品牌通用型试剂盒测大肠杆菌，结果核酸浓度仪显示200ng/μl，实际跑胶根本看不见条带——多糖干扰吸光值这事厂家可不会告诉你。

最新行业数据显示：53%的实验失败源于样本处理不当。最近发现个反常识现象：用65℃预热的TE缓冲液溶解DNA，稳定性比常温溶解高40%，特别是对GC含量高的样本效果显著。下次做PCR不妨试试看，说不定能解决你多年未解之谜。